Вирусы кратко
.docx
Грипп Семейство Orthomyxoviribae |
Спиральная однонитевая минус РНК. Суперкапсид +. Н – гемагглютинин (связывается с рецепторами). N – нейраминидаза (модицифирует рецепторы и обеспечивает эндоцитоз) |
Экспресс: обнаружение АГ РИФ, ИФА, ПЦР. Вирусологический: заражение собак, РКЭ, почек, макак => РСК, РТГА, ТФА. Тип определ. в РСК, подтип в РТГА |
Живая вакцины, инактивированная вакцина |
Симптоматическое; ремантидин препятствует репродукции вируса гриппа А, ингибиторы нейраминидазы, противогриппозный донорский иммуноглобулин |
Постинфекционный иммунитет длительный и стойкий. |
Краснуха Togaviridae – Rubivirus |
Однонитчатая плюс РНК. Сложный. Белки С, Е1, Е2. |
Смывы с носа, зева, крови, мочи, испражнений. Зараж. культ. кл. => РН, РТГА, РИФ, ИФА. Обнаруж. АТ: РН, РСК, РТГА, РИФ, ПЦР |
Живая вакцина в 1, 6 и в 13 лет. |
Симптоматическое |
Пожизненный |
Корь Paramyxoviridae – Morbilliviridae |
Однонитчатая минус РНК. Суперкапсид +. Нуклеокапсидный протеин NP, матриксный белок M, а также поверхностные гликозилированные белки липопротеиновой оболочки — гемагглютинин H, белок слияния F и гемолизин. В |
Смыв с носоглотки, соскоб с сыпи, кровь, моча. Зараж культ. кл. => РИФ, РТГА, РН. Характерно наличие многоядерных клеток и АГ в них. Сероиагностика: РСК, РТГА, РН. |
Аттенуированная вакцина или ассоциативная (корь, паротит, краснуха). В 1 и 6 лет. |
Симптоматическое |
Пожизненный |
Коронавирус Coronaviridae – Coronavirus (Betacoronavirus) |
РНК Гликопротеины Е1 и Е2 (адсорбция и инфазия) |
Смыва с носоглотки, кровь. ПЦР, РСК. |
Не разработана
|
Симптоматическое |
Не изучен |
Респираторные аденовирусы Семейство Adenoviridae, включают род Mastadenoviridae (человека и животных) и род Aviadenoviridae (птиц) |
Двунитевая линейная ДНК Белки: II-XII, Е1-Е4, L1-L5. E1 – транспорт мРНК в цитоплазму и трансляцию; Е2 – синтез ДНК-связывающего белка; АГ-А – группоспецифический. АГ-В – подгруппы; АГ-С – типофспецифический. |
АГ – в ИФА Выявление вируса: отделяемое носоглотки, конъюнктивы, кровь, испражнения. Использ. клетки эмбриона человека =>РСК, РТГА, РН. |
Против некоторых штаммов живые иммуногенные пероральные вакцины |
Симптоматическое |
|
Вирус натуральной оспы Poxviridae, подсемейства Chordopoxviridae |
Двунитевая линейная ДНК. Содержит гемагглютинин. |
Электронная мик-я пустул, световая мик-я пузырьков – крупные клетки с тельцами Гваринели. В мазках по Морозову – тельца Пашена. Заражение РКЭ. Материал кровь, отдел. Носоглотки, соскоб сыпи. РСК, ИФМ. |
Вакцинация |
Марборан (подавляет репродукцию вируса) |
Пожизненный |
Полиомиелит Picornaviridae – Enterovirus- Poliovirus |
Однонитевая РНК. Белки VP1- VP4 |
Кал, отделяемое из носоглотки, биоптаты мозговой ткани, лимф. узл. РН в культ. клеток. РН, ИФА, ЦПД. ПЦР, радиальная иммунодиффузия. |
Убитая и чаще живая вакцина в 3, 4 с половиной, 6, 18, 20 мес и в 14 лет. |
Гомологичный иммуноглобулин |
Пожизненный |
Ротавирус Rotaviridae – rotavirus |
Двунитевая + РНК. VP1 – РНК-полимераза. VP2 – формирует ядро вируса и связывает вирусный геном. VP3 – гуанилил-трансфераза. VP4 – связывается с рецепторами клеток и управляет внедрением. VP6 – формирует толщу капсида, определяет вид. VP7 – определяет тип. |
Обнаружение вируса в испражнениях. ИФА, иммунодиффузия, преципитация в агаре, РСК, коагглютинация, РНК-зонды. Серо: РСК, ИФА, РН, ИФ,РПГА с антительным диагностикумом. |
Вакцинация (не входит в календарь) |
Прекращение дегидратации, восстановление водно-солевого баланса, нормальное питание |
Нестойкий |
Бешенство Rabdoviridae – Lyssavirus |
Пулевидная форма Негативная однонитевая РНК Суперкапсид+ |
Отпечатки мозговой ткани и слюнных желез. В пирамидных кл. – эозинофильные включения (тельца Бабеша – Негри). АГ в тех же препаратах – прямая или непрямая иммунофлуоресценция. Вирусологический: внутримозговое заражение б/мышей или внутримышечно кроликов (хомячков). АТ: РН, РСК, иммунофлуоресценции, иммуносорбетные р-ции (РИМ, ИФМ). |
Вакцинация и гамма-глобулин. |
Антирабическая вакцина и антирабический гамма-иммуноглобулин |
Поствакцинальный до года |
Клещевой энцефалит Flaviviridae – Flavivirus |
Однонитчатая + РНК Гликопротеин Е. Белок М |
Кровь, ликвор, культура клеток РТГА, РН, РСК, РИФ. Экспресс: обнаруж. АГ РНГА, ИФА, ПЦР |
Прививка, специальный гомологичный Ig. |
Прививка, специальный гомологичный Ig. |
Стойкий |
Вирус Эбола Filoviridae – Filovirus |
Одноцепочечная негативная РНК |
Кровь, моча, геморр. экс. Заражение культуры клеток обезьян => РН, РСК, ИФМ, РИФ. |
Вакцина |
Симптоматическое: поддержание водно-солевого баланса, функции почек и печени, борьба с геморрагическим синдромом, переливание плазмы, введение интерферонов. |
|
ВИЧ Retroviridae - Lentovirus |
Две идентичные молекулы РНК Gp120(125) –связь с СД4* (прикрепление) Gp41(36) –вводит гидрофобные участки в мембрану и притягивает вирус. P24 – образует капсид. Ревертаза (RT) – обратная транскриптаза Протеаза (PR) – разрезает длинные белки для создания вируса. Интеграза (IN) – отрезает свободные концы ДНК, переносят ДНК в ядро.
|
ИФА, иммуноблоттинг, ПЦР |
Нет |
1. Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскрипции – ингибируют обратную транскриптазу, а именно комформационную изменчивость обратной транскриптазы (ННИОТ). 2. Нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы – подавляют активные центр фермента. (НИОТ). |
Нет |
Везикулярный стоматит Rhabdoviridae – Vesicolovirus |
РНК, похож на бешенство. |
Из везикул на культ. кл или РКЭ. РИФ, РСК, ИФА. |
Нет |
Симптоматическое |
|
Вирусы ЕСНО Picornaviridae – Enterovirus |
Одноцепочечная + РНК |
Заражение клеток почек обезьяны из ликвора (фекалий). АТ: РН, РСК, РТГА |
Нет |
Симптоматическое |
Гуморальный, типоспецифический |
Коксаки А и В Picornaviridae – Enterovirus |
Одноцепочечная + РНК |
Заражение культуры клеток, мышей-сосунков (мазки носоглотки, испражнения). Тип опред. в РТГА, серовар - РСК, РН |
Нет |
Симптоматическое |
|
Вирус Норфолк Caliciviridae – Norovirus |
+РНК Беок VP1 и VP2 |
ПЦР, ИФА (не оч чувств). |
Нет |
Симптоматическое |
Временный |
Простой герпес Herpesviridae - Simplexvirus |
ДНК вирус |
Окрашенные мазки – гигантские многоядерные клетки (синцитий). ЦПЭ. РИФ, ИФА. Серо: РСК, РИФ, ИФА. ПЦР. |
Инактивированная культуральная герпетическая вакцина. |
Интерферон, ацикловир, фамцикловир, валацикловир, идоксуридин, видарабин, теброфеновая мазь. |
Клеточный, ГЗТ |
Ветряная оспа и опоясывающий лишай Herpesviridae – Varicellovirus |
ДНК |
Содержимое высыпаний, отделяемое носоглотки, кровь. В мазках по Роман-Гим: синцитий и внутриядерные включения (тельца Липшютца). РИФ, ИФА, РСК, РН. |
Живая вакцина для VZV |
Ацикловир, видарабин, интерфероны, 1-2% KMnO4, зеленка. |
Пожизненный |
Вирус Эпштейна-Барр Herpesviridae - Lymphocryptovirus |
ДНК Ядерные АГ 1, 2, 3А, 3В, 3С, латентные протеины, латентные мембранные протеины, LMPs – мембранный белок с онокогенноподобным действием |
Обнаружение атипичных лимфоцитов, РА |
Нет |
Симптоматическое |
Пожизненный |
Вирус цитомегалии Herpesviridae - Cytomegalovirus |
ДНК |
Кровь, моча, молоко, моча, слюна, отделяемое цервикального канала, ликвор. Клетки – «Глаза совы» - внутриядерные включения. Вирусологич: в культ. кл. ПЦР, РИФ, ИФА, РСК. |
Нет |
Аналоги нуклеозидов, иммуномодуляторы, индукторы интерферона, нормальный иммуноглобулин человека. |
Гуморальный и клеточный. |
Герпесвирусы типов 6,7,8 6 и 7 Herpesviridae –Roseolovirus 8 Herpesviridae -Rhadinovirus |
ДНК 6 – внезапная экзантема младенцев и синдром хр. усталости с повыш. t и потливостью; 7 – у больных СПИД синдром хр. усталости; 8 – Саркома Капоши |
6 и 7 – ко-культивирование лимфоцитов периферийной крови с митогенактивированными лимфоцитами. Все – ПЦР. |
|
|
|
Вирус гепатита А Heparnovirus - Picornaviridae |
Однонитевая + РНК |
РСК, иммунофлуоресценция, РА, ИФМ, РИМ. В нашей стране для этой цели предложена тестсистема – «ДИАГН-А-ГЕП». Принцип работы этой тест-системы следующий. На стенках полистироловых луночек сорбируются вначале антитела к иммуноглобулинам класса М (антииммуноглобулины М), затем добавляется исследуемая сыворотка больного. Если в ней есть антитела класса IgM, они будут связываться анти-антителами М, затем добавляется специфический вирусный антиген (вирус гепатита А), который получают путем выращивания в культуре клеток. Система промывается, и к ней добавляются противовирусные антитела, меченные пероксидазой хрена. Если произошло взаимодействие всех четырех компонентов системы, возникает четырехслойный «сэндвич»: 1) антииммуноглобулины М, 2) иммуноглобулины М (против вируса гепатита А – в исследуемой сыворотке больного), 3) вирусный антиген, 4) антивирусные антитела, меченные ферментом. Для обнаружения этого комплекса в луночки добавляют субстрат для фермента. Под влиянием фермента он разрушается, и образуется окрашенный продукт. Интенсивность окраски можно измерить количественно с помощью спектрофотометра или фотоколориметра. |
Вакцина |
Интерферон |
Прочный и длительный |
Вирус гепатита В Hepadnaviridae – Orthohepadnavirus |
ДНК Сложный HBsAg – поверхностный (superficial), или растворимый (soluble), или австралийский антиген. 2. HBcAg – сердцевинный антиген 3. HBeAg – антиген e, локализован в сердцевине вириона и, в отличие от HBcAg, не только присутствует в составе вириона, но и циркулирует в крови в свободном виде или в виде комплекса с антителом анти-HBeAg |
РОПГА (обнаружение вируса или АГ HBsAg). АТ: РСК, РПГА, РИМ, ИФМ. ПЦР |
Вакцинация в первый день, 1 и 6 месяц. |
Интерферон, интерфероногены, ингибиторы ДНК-полимеразы. |
Гуморальный, у хроников нет клеточного. |
Вирус гепатита С Flaviviridae – Hepacivirus |
РНК+ Суперкапсид + |
ПЦР, ИФА |
Нет |
Интерфероны |
СД4 против NS3 |
Вирус гепатита D Не классифицирован |
Дефектный, без оболочки. |
АТ в ИФА |
Вакцина против ВГВ |
Интерфероны |
|
Вирус гепатита G Flaviviridae - Hepacivirus |
Одноцепочечная + РНК |
ПЦР, ИФМ |
|
|
|
Вирус гепатита E Calciviridae – Hepavirus |
Одноцепочечная + РНК |
Специальная тест-система, для обнаружения АТ. |
Цельновирионная вакцина |
Интерферон |
Пожизненный |
Онкогенные вирусы.
РНК-содержащие Сложные. Тип А, тип В (cr молоч железы у мышек), тип С (наибольш группа), тип Д (у обезьян), вирус бычьего лейкоза. Две группы: 1. Эндогенные (составляют элементы генома всех органов и тканей организма и передаются вертикально. Не онкогенный для представителей, в клетках которого он постоянно.) 2. Экзогенные (передаются в популяции) ОНКОГЕНЕЗ: onc-ген в норме неактивен. Scr-ген – Саркома Рауса в кур, ras-ген – саркома у крыс. Включение в геном кленки ДНК провируса – активация onc-гена – трансформация клетки. Исключение ДНК провируса из хромосомы – onc-ген встраивается в вирусный геном – транспорт в новые клетки в активном состоянии. Активация может быть, результатом увеличения транскрипционной активности в следствие действия трансактиватора. Помимо онковирусов активацию протоонкогена вызывают мутагены – подвижные генетические элементы. Retroviridae - Deltaretrovirus Вирусы Т-клеточного лейкоза человека: Поражают СД4-лимфоциты HTLV1 (возбудитель Т-клеточного лифолейкоза взрослых. Экзогенный) HTLV2 (Волосисто-клеточный лейкоз) Они оба: Передается половым, трансплацентарно, трансфузионно. Инкубация 20 лет, далее летальный исход. Поражают иммунную систему, в крови АТ, лечения и профилактики нет. |
ДНК-содержащие Вызывают трансформацию непермиссивных клеток (не реплицируются в формировании нового поколения вирионов). Экспрессия «ранних» генов – набор белков Т-АГ. Белок р53 – супрессор опухолевого роста (его синтез увеличивается при повреждении ДНК) – ограничивает клеточное деление. Рв – ген, кодирующий белок, контролирующий пролиферацию. Papillomaviridae – вирус папилломы человека, кроликов, собак. Паразитирует в клетках плоского эпителия.Вызывает доброкачественные бородавки, папилломы, кандиломы в области половых органов, ануса, слизистой дыхательных путей, жКТ, коже. В ядре – в виде независимой двуцепочечной ДНК. Типы 2,5,8 –рак кожи, злокачественные опухоли полости рта, гортани. Типы 16, 18 – 100% рак шейки матки. Polyomaviridae – продуктивная инфекция в клетках природных хозяев. Стимулируют образование опухолей широкого гистологического спектра. Экспрессирует ранние белки, препятствует образованию р53. JC-лейкоэнцефалопатия – опухоль мозга у новорожденных хомячков. SV-40 – не патогенен для человека. Adenoviridae – серотипы 12, 18, 31 –саркомы у новорожденных хомячков и трансформация культуры клеток грызунов. Для еловека не опасен. Вирус гепатита В – первичный рак печени – интеграция вирусной ДНК в район сильного промотора – синтез и накопление HВx-АГ – связывание супрессора р53. Poxviridae – эритематозные узелки на коже лица, шеи, век, половых органов. Передается при прямом или половом контакте. Herpesviridae – ВПГ2 – рак шейки матки ВЭБ – лимфома Бэркитта (опухоль верхней челюсти), карцинома носоглотки. |
Антигенная структура гриппа.
Гликопротеины гемагглютинин (Н) и нейраминидаза (N)— ключевые белки для размножения вируса типов «A» и «B». Гемагглютинин используется для проникновения в клетку, нейраминидаза — для выхода из неё
H1N1 – испанский и свиной
H2N2 – азиатский
H3N2 – гонконский
H5N1 - птичий
Вакцинация
Вирус гепатита В первые 24 часа, 1 месяц, [группа риска: 2 мес и в 12 мес], 6 месяц.
Полиомиелит 3 мес, 4,5 мес, 6 мес, 18 мес, 20 мес и 14 лет.
Корь, краснуха, паротит – 12 мес, 6 лет.
Реакция иммунофлуоресценции (РИФ)
Основана на использовании меченых красителями антител. При наличии вирусного антигена он связывается с мечеными антителами, и под микроскопом наблюдается специфическая окраска, которая говорит о положительном результате. При этом методе, к сожалению, невозможна количественная интерпретация результата, а только лишь качественная.
Различают три разновидности метода прямой, непрямой, с комплементом.
Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.
ИФА иммуноферментный анализ
Похож на РИФ, однако в качестве маркеров используют не красители, а ферменты, превращающие бесцветные субстраты в окрашенные продукты, что и дает возможность количественной оценки содержания как антигенов, так и антител.
- Отмывают не связавшиеся антитела и антигены.
- Добавляют бесцветный субстрат, и в лунках с антигеном, который мы определяем, произойдет окрашивание, т.к. там будет связанный с антигеном фермент, после чего на специальном приборе оценивают интенсивность свечения окрашенного продукта.
По похожей схеме происходит и выявление антител.
Реакция непрямой(пассивной) гемаглютинации (РПГА).
В РНГА выявляют антитела сыворотки крови с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума, который представляет собой эритроциты с адсорбированными на них антигенами.
Эритроциты (или частицы латекса) с адсорбированными на них антигенами взаимодействуют с соответствующими антителами сыворотки крови, что вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка. При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде пуговки.
РПГА ставят в пластиковых планшетках или в пробирках с разведениями сыворотки крови больного, к которым добавляют эритроцитарный диагностикум.
Иногда применяют антительный эритроцитарный диагностикум - эритроциты, на которых адсорбированы антитела. Например, можно обнаружить ботулинический токсин, добавляя к нему эритроцитарный антительный ботулинический диагностикум (такую реакцию называют реакцией обратной непрямой гемагглютинации (РОНГА).
РТГА
Если стоит задача выявления антител, то сделать это возможно при помощи реакции торможения гемагглютинации (РТГА). В лунку с вирусом и эритроцитами закапывают различные пробы. При наличии антител они свяжут вирус, и эритроциты упадут на дно с образованием «пуговки».
Для проведения РТГА с гриппозными антителами используют диагностикумы из штаммов, резистентных к неспецифическим сывороточным ингибиторам. Перед постановкой реакции парные сыворотки крови взятые в острой фазе инфекции и в период реконвалесценции, разводят в 10 раз физиологическим раствором (ФР) и прогревают в водяной бане при 56 °С в течение 30 мин.
При проведении РТГА с вирусами гриппа используют эритроциты кур или человека 0(1) группы крови, с вирусами парагриппа - эритроциты морской свинки.
Предварительно в реакции гемагглютинации (РГА) определяют титр антигена. Для этого вряду лунок планшета, содержащих по 0,1 мл ФР, готовят двукратные разведения антигена (начиная с 1:2 до титра, указанного на этикетке). После этого в каждую лунку вносят дополнительно по 0,1 мл ФР и 0,2 мл 1% суспензии эритроцитов. Для контроля оседания эритроцитов в отсутствие антигена в дополнительном ряду смешивают по 0,2 мл ФР и 0,2 мл эритроцитов. Через 45-60 мин инкубации при полном оседании эритроцитов в контрольном ряду учитывают результаты реакции.
ПЦР ( Полимеразная Цепная Реакция)
Суть этого метода заключается в обнаружении специфического фрагмента ДНК или РНК вируса путём его многократного копирования в искусственных условиях. ПЦР можно проводить только с ДНК, то есть для РНК-вирусов предварительно необходимо произвести реакцию обратной транскрипции.
Непосредственно ПЦР проводят в специальном приборе, под названием амплификатор, или термоциклер, который поддерживает необходимый температурный режим. ПЦР-смесь состоит из добавленной ДНК, которая содержит интересующий нас фрагмент, праймеров (короткий фрагмент нуклеиновой кислоты, комплиментарный ДНК-мишени, служит затравкой для синтеза комплиментарной цепи), ДНК-полимеразы и нуклеотидов.
Стадии цикла ПЦР:
- Деннатурация-первая стадия. Температура повышается до 95 градусов, цепочки ДНК расходятся друг относительно друга.
- Отжиг праймеров. Температуру понижают до 50-60 градусов. Праймеры находят комплиментарный участок цепи и связываются с ним.
- Синтез. Температуру вновь повышают до 72, это рабочая температура для ДНК-полимеразы, которая, отталкиваясь от праймеров, строит дочерние цепи.
Цикл многократно повторяется. Через 40 циклов из одной молекулы ДНК получается 10*12 степени копий копий искомого фрагмента.
Реакция связывания комплемента (РСК) заключается в том, что при соответствии друг другу антигенов и антител они образуют иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), те происходит связывание комплемента комплексом антиген - антитело. Если же комплекс антиген - антитело не образуется, то комплемент остается свободным. PCK проводят в две фазы 1-я фаза - инкубация смеси, содержащей антиген + антитело + комплемент, 2-я фаза (индикаторная) - выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана, и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген - антитело происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет (реакция положительная). Если антиген и антитело не соответствуют друг другу (в исследуемом образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит - антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз (реакция отрицательная).
На чувствительных клетках: полиомиелит вызывает ЦПД
HeLa, культура почек обезъян: Коксаки A,B ECHO, Грипп, Корь,
Культура клеток: вирус гепатита А без ЦПД, Грипп, ОРВИ
Культура клеток (спец среды ВНК-21, Vero, RK-21, SIRC), Краснуха без ЦПД, Корь, Бешенство (Тельца Бабеша)
Куриный эмбрион Грипп, вирус простого герпеса, вирус натур. оспы
Почки собаки: Грипп
Почки человека: Корь
Почки хомячка: бешенство
Фибробласты человека: бешенство, Цитомегалия
Т-лимфоциты: ВИЧ
Культура клеток первичного рака печени: гепатит В
Диплоидные фибробласты: Ветряная оспа